人腦血管周細(xì)胞

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備 
記錄方式可采用攝影照片、縮時(shí)電影、電視等多種手段。
5.研究的范圍比較廣泛
應(yīng)用的學(xué)科領(lǐng)域較為寬廣，如細(xì)胞學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、生物化學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)等；
適用的對(duì)象范圍廣，從低等動(dòng)物到高等動(dòng)物，一種動(dòng)物的不同年齡階段以及不同組織，都可進(jìn)行有針對(duì)性的研究。
6.研究的費(fèi)用相對(duì)較經(jīng)濟(jì)
可提供大量、同一時(shí)期、重復(fù)性好的、生物學(xué)性狀相似的實(shí)驗(yàn)對(duì)象。

?

實(shí)驗(yàn)操作步驟：  公司產(chǎn)品僅用于科研，不得用于臨床．
a．采用認(rèn)可的方案處死嚙齒動(dòng)物。    
b．立即在無(wú)菌超凈臺(tái)內(nèi)用70％乙醇擦洗整個(gè)動(dòng)物。  
c．用無(wú)菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用無(wú)菌鑷子將皮膚扯向后腿。   
d．用另一無(wú)菌的剪刀和鑷子切開(kāi)腹部，取出含有胚胎的子宮，置于無(wú)菌的培養(yǎng)皿上。   
e．剔除胚胎周圍的包膜，將胚胎放于無(wú)菌的含有無(wú)菌PBS的100ml燒杯中。   
f．漂洗胚胎，去掉PBS。繼續(xù)用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。

實(shí)驗(yàn)材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個(gè)； 
3、50ml離心筒2個(gè) 
4、滅菌培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè) 
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè) 
6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊； 
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 
8、酒精燈1臺(tái)；

?

細(xì)胞凍存：
對(duì)培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行凍存的最佳方法是將細(xì)胞置于含有(DMSO)等冷凍保護(hù)劑的*培養(yǎng)基中于液氮中儲(chǔ)存。冷凍保護(hù)劑可降低培養(yǎng)基的冰點(diǎn)，并可減緩冷卻速度嗎，大大降低冰晶形成的危險(xiǎn)  (冰晶可損傷細(xì)胞，導(dǎo)致細(xì)胞死亡)。
注：DMSO 可促進(jìn)有機(jī)分子進(jìn)入組織。操作含DMSO的試劑時(shí)，應(yīng)采用與此類物質(zhì)安全危害相適應(yīng)的設(shè)備和操作規(guī)范，并應(yīng)按照當(dāng)?shù)胤ㄒ?guī)處置此類試劑。 
細(xì)胞凍存指導(dǎo)原則
凍存細(xì)胞系以備將來(lái)之用時(shí)，必須遵守以下原則。與其他細(xì)胞培養(yǎng)操作一樣，我們建議您嚴(yán)格遵守您所用細(xì)胞系附帶的操作說(shuō)明，以便獲得最佳結(jié)果。 
1）在高細(xì)胞濃度情況下進(jìn)行培養(yǎng)細(xì)胞的凍存，并且細(xì)胞傳代次數(shù)盡可能少。確保凍存前活細(xì)胞百分比至少為90%。請(qǐng)注意最佳凍存條件取決于所用細(xì)胞系。 
2）細(xì)胞應(yīng)緩慢冷凍，可使用可控制降溫速度的低溫冰箱或者低溫冷凍容器使溫度每分鐘大約降低1°C。
3）必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑
4）將冷凍的細(xì)胞于 -70°C 以下溫度儲(chǔ)存；溫度高于 -50°C 時(shí)，冷凍的細(xì)胞將開(kāi)始變質(zhì)。 
5）必須使用無(wú)菌凍存管儲(chǔ)存冷凍的細(xì)胞。裝有冷凍細(xì)胞的凍存管可浸于液氮或者在液氮上方的氣相空間內(nèi)保存 
6）必須穿戴個(gè)人防護(hù)設(shè)備。 
7）所有與細(xì)胞接觸的溶液和設(shè)備均應(yīng)為無(wú)菌狀態(tài)。必須采用正確的無(wú)菌技術(shù)，并且在層流通風(fēng)櫥內(nèi)進(jìn)行。

實(shí)驗(yàn)操作：
1、培養(yǎng)瓶預(yù)包被。試驗(yàn)前一天預(yù)包培養(yǎng)瓶，置于超靜臺(tái)吹干或45℃烘箱烘干（切記保持無(wú)菌），4℃冰箱放置，備用。
2、取材：正常成年大鼠腹腔注射5%麻醉，75%酒精浸泡，無(wú)菌條件下迅速取出大鼠主動(dòng)脈。
3、材料預(yù)處理：將獲取的血管放入含有1% P/S的1 × PBS （pH 7.4 ）中反復(fù)洗滌，去除血管外部的洗滌液澄清，用無(wú)菌鑷子剝?nèi)ネ饽っ娴臍埩艚M織。PBS洗滌凈。
4、除去內(nèi)皮細(xì)胞：將血管縱向剪開(kāi)， 內(nèi)膜面向上，無(wú)菌鑷子沿中軸方向反復(fù)刮動(dòng)內(nèi)膜層4-5遍，去掉內(nèi)皮細(xì)胞，用1 × PBS （pH 7.4 ）洗滌3次。
5、分離中膜：將去掉內(nèi)膜的血管，繼續(xù)刮動(dòng)分離中膜，去掉外膜，用眼科剪將內(nèi)膜剪碎為1×1mm3的小塊，加入1 × PBS （pH 7.4 ），轉(zhuǎn)移到15ml 離心管中，PBS洗滌3次，離心收集沉淀物。
6、消化：在洗凈的內(nèi)膜碎塊中加入消化酶液，將離心管放入37℃水浴消化15min。
7、終止消化：吸出消化液入新的離心管中，按1：1加入消化終止液，中止酶反應(yīng)；余下的組織繼續(xù)加入消化液，消化15min ，重復(fù)消化3次。
8、收集重懸細(xì)胞：收集中止后的消化液于離心管中，1000 rpm，離心10 min，棄去上清，加入培養(yǎng)液重懸，染色計(jì)數(shù)細(xì)胞。
9、培養(yǎng)細(xì)胞密度：調(diào)整細(xì)胞密度以5 × 105個(gè)/ml 接種入培養(yǎng)瓶。
10、培養(yǎng)：放置于37℃，5% CO2培養(yǎng)箱中。

HO-8910 人卵巢癌細(xì)胞SSPEBUFFER,0.1X,WITH0.2%SDS 0.1X SSPE 緩沖液,含 0.2% SDS超級(jí)透明無(wú)色液體RTsigma

ZR-75-30人癌細(xì)胞 Human breast cancer cell line ZR-75-30 RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS1,3-二流代坊 97% 1,3-DITHIOLcNq 489-4-3

FIGF Protein Rat 重組大鼠 VEGF-D / VEGFD / FIGF 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)言醋二雙胍相關(guān)物質(zhì)B MqtforMin Rqlctqd CoMpound B;1-Mqthylbigucnidq xy7nochloridq 1674-6-0

大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞(RA)(5×105) Caki-1, 人腎透明細(xì)胞癌皮膚轉(zhuǎn)移細(xì)胞 Human二乙二醇單[(1,1,3,3-四甲基丁基)本基]，英文名或英文縮寫：Triton x-114，級(jí)別：BR，85%，規(guī)格：100毫克

非洲綠猴腎細(xì)胞;VERO C1008 (E6)Adenosine 10g/25g/50g/100g Amresco 0325
HAVCR2 Others Human 人 TIMD3 / TIM3 / HAVCR2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 鹽酸多佐胺；鹽酸杜塞酰胺（標(biāo)準(zhǔn)品）Dorzolamide HCl質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

魚源細(xì)胞甲磺酸多沙唑嗪Doxazosin Mesylate質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

HA Others H3N2 甲型流感 H3N2 (A/Perth/16/2009) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 甲磺酸多沙唑嗪（標(biāo)準(zhǔn)品）Doxazosin Mesylate質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

II型膠原酶(含10mL酶解緩沖液) 1mL鹽酸多柔比星/鹽酸阿霉素Doxorubicin HCl/Adriamycin質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

U-373MG-EGFP(Ubc-EGFP慢病毒構(gòu)建穩(wěn)定株)人腦神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞 U-373MG-EGFP (Ubc-EGFP leiviral consuct stable sain) of human brain glioma cells DMEM+10% FBS鹽酸多柔比星/鹽酸阿霉素(標(biāo)準(zhǔn)品)Doxorubicin HCl/Adriamycin質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
人腦血管周細(xì)胞GP1BB Others Human 人 GP1Bβ / CD42c 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 阿托伐醌,阿托喹酮（標(biāo)準(zhǔn)品）Atovaquone質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

人肺巨細(xì)胞癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株;PG-BE1阿昔洛韋鈉鹽Acyclovir  質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口

CLEC10A Others Mouse 小鼠 CLEC10A / MGL1 / CD301 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 阿昔洛韋單1酸鹽Acyclovir Monophosphate 質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口

COLO320/DM 人結(jié)腸癌細(xì)胞阿昔洛韋-d4Acyclovir-d4 質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口

HCT 116人結(jié)腸癌細(xì)胞 HCT 116 human colon cancer cells MycCoy's 5A+10%FBSN2-乙酰基-9-（2-乙酰氧基乙氧基甲基）鳥(niǎo)嘌呤（阿昔洛韋雜質(zhì)）N2-Acetyl-9-(2-acetoxyethoxymethyl)guanine (Acyclovir Impurity)質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口
冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。