檸檬酸合酶(CS）測試盒微量法

實驗結(jié)果判斷我有妙招：

1、定量測定結(jié)果根據(jù)標準曲線計算樣品中待測物的含量。

2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2～3SD，作為陽性結(jié)果的閾值。

3、以P／N值(陽性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2．1為陽性，P／N值小于2．1，但大于1．5為可疑，P／N小于1．5為陰性。

4、ELISA試劑盒目測定性法：加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后，肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照，與陰性對照的顏色接近者，判定為陰性。

與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求：

① 易揮發(fā)、低燃點的試劑要密封，放于陰涼、通風(fēng)、遠離火源處保存。

② 與水蒸氣，水發(fā)生反應(yīng)的物質(zhì)要密封，并遠離水源保存。

③ 易與氧氣作用的試劑，應(yīng)將其固體或晶體密封保存，不宜長期存放其水溶液，亞硫酸，氫硫酸溶液要密封存放，鉀，鈉，白磷更要采用液封形式。

④ 與二氧化碳反應(yīng)的物質(zhì)要密封保存，其相應(yīng)的溶液較固體更易反應(yīng)，所以更要注意密封保存。

⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封，放于陰涼通風(fēng)處保存。

本試劑盒僅供研究使用公司實驗室提供免費代測,7個工作日出結(jié)果,提供原始數(shù)據(jù)!

商品介紹：

試劑組成和配制:

提取液：液體 100 mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：液體 5 mL×1 瓶，4℃避光保存。

試劑二：液體 15 mL×1 瓶，4℃保存。

試劑三：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。

試劑四：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。

操作步驟：

1. 樣品的準備：

a. 細胞樣品的準備：收集細胞，用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心，取上清作為待測樣品。

b. 組織樣品的準備：動物用生理鹽水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心，取上清作為待測樣品。

d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒（P1511）測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細胞和組織的差異會比較大，該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測。

e. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計的蛋白使用量，用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當稀釋樣品。例如，小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準備好的樣品如果當天測定，可以冰浴保存；如果當天不能完成測定，可以-70 ℃凍存，但建議盡量當天完成測定。

2. 試劑盒的準備工作：

a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表，根據(jù)待檢測樣品(包括標準品) 數(shù)量，配制適量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可當天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降，必須注意在使用前先輕輕離心一下，然后適當混勻后再使用。

b. 反應(yīng)啟動工作液配制：將試劑盒提供的反應(yīng)啟動液 (40X) 溶解后混勻，按1μl 反應(yīng)啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋，即為反應(yīng)啟動工作液。4℃或冰浴保存，可當天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

c. (可選做) SOD 標準品準備：需自備SOD標準品，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標準品稀釋至如下系列濃度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升，參考樣品進行檢測。說明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降， SOD標準品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用；本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標準品，但可以使用SOD標準品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。

100mL TEA Buffer,0.2M,pH8.5  TEA Buffer,0.2M,pH8.5  常溫保存

100µL 小鼠抗VSV-G標簽單抗 Anti VSV-G-Tag Mouse MAb -20℃保存

2 ug pT7TS pT7TS 低溫運輸，-20℃保存

100mL RNase-free Tris HCl,1M,pH 8.5  常溫

2 ug pDAP101 pDAP101 低溫運輸，-20℃保存

動力-硝酸鹽培養(yǎng)基 Power - nitrate medium 250g

150mL 丙烯葡聚糖凝膠 S-100 HR Sephacryl S-100 HR 室溫保存

50T 偽狂犬病毒PCR檢測試劑盒  低溫運輸，-20℃保存

2 ug pCAAGS pCAAGS 低溫運輸，-20℃保存

250ml Glucose-Gelatin Veronal Buffer with EDTA (GGVBE)   Glucose-Gelatin Veronal Buffer with EDTA (GGVBE)   常溫保存

1盒 X 光片（8×10英寸） X-Ray Film 避光保存

檸檬酸合酶(CS）測試盒微量法PACAP-38  苷酸環(huán)化激活肽-38抗體 規(guī)格: 0.1ml

phospho-GSK-3 Beta(Ser21)  磷酸化葡萄糖合成激3β抗體 GSK3α(Phospho-Ser21) 規(guī)格: 0.1ml

Netrin 4  軸突生誘向因子4抗體 規(guī)格: 0.1ml

AT2R2  管緊張素Ⅱ受體2抗體 0.2ml

FAP1/PTPN13  Fas相關(guān)磷酸1/蛋白酪磷酸非受體型13抗體 規(guī)格: 0.2ml

phospho-ITGB4(Tyr1526)  磷酸化整合素β4抗體 規(guī)格: 0.1ml

Donkey Anti-Guinea pig IgG/Alexa Fluor 488  Alexa Fluor 488標記的驢抗豚鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml

phospho-ILK-1(Ser246)   磷酸化整合素連接激1抗體 規(guī)格: 0.1ml

TRIB3/p65 interacting inhibitor of NF-kappaB  神經(jīng)細胞死亡誘導(dǎo)蛋白激抗體 規(guī)格: 0.1ml

RERG  Ras相關(guān)雌激素調(diào)節(jié)生抑制蛋白 規(guī)格: 0.2ml

Rabbit Anti-dog IgG/FITC  FITC標記的兔抗狗IgG 規(guī)格: 0.3ml

PSGL-1/CD162  P選擇素糖蛋白配體1抗體 規(guī)格: 0.1ml