ATP檸檬酸裂解酶（ACL）測試盒微量法

商品介紹：

提取液：液體 100 mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：液體 5 mL×1 瓶，4℃避光保存。

試劑二：液體 15 mL×1 瓶，4℃保存。

試劑三：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。

試劑四：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。

本試劑盒僅供研究使用公司實驗室提供免費代測,7個工作日出結(jié)果,提供原始數(shù)據(jù)!

實驗結(jié)果判斷我有妙招：

1、定量測定結(jié)果根據(jù)標準曲線計算樣品中待測物的含量。

2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2～3SD，作為陽性結(jié)果的閾值。

3、以P／N值(陽性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2．1為陽性，P／N值小于2．1，但大于1．5為可疑，P／N小于1．5為陰性。

4、ELISA試劑盒目測定性法：加入底物經(jīng)酶解和終止反應后，肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照，與陰性對照的顏色接近者，判定為陰性。

與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求：

① 易揮發(fā)、低燃點的試劑要密封，放于陰涼、通風、遠離火源處保存。

② 與水蒸氣，水發(fā)生反應的物質(zhì)要密封，并遠離水源保存。

③ 易與氧氣作用的試劑，應將其固體或晶體密封保存，不宜長期存放其水溶液，亞硫酸，氫硫酸溶液要密封存放，鉀，鈉，白磷更要采用液封形式。

④ 與二氧化碳反應的物質(zhì)要密封保存，其相應的溶液較固體更易反應，所以更要注意密封保存。

⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封，放于陰涼通風處保存。

操作步驟：

1. 樣品的準備：

a. 細胞樣品的準備：收集細胞，用4 ℃或冰浴預冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預冷組織細胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心，取上清作為待測樣品。

b. 組織樣品的準備：動物用生理鹽水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心，取上清作為待測樣品。

d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒（P1511）測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細胞和組織的差異會比較大，該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測。

e. 根據(jù)蛋白濃度和預計的蛋白使用量，用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當稀釋樣品。例如，小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準備好的樣品如果當天測定，可以冰浴保存；如果當天不能完成測定，可以-70 ℃凍存，但建議盡量當天完成測定。

2. 試劑盒的準備工作：

a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表，根據(jù)待檢測樣品(包括標準品) 數(shù)量，配制適量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可當天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降，必須注意在使用前先輕輕離心一下，然后適當混勻后再使用。

b. 反應啟動工作液配制：將試劑盒提供的反應啟動液 (40X) 溶解后混勻，按1μl 反應啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋，即為反應啟動工作液。4℃或冰浴保存，可當天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

c. (可選做) SOD 標準品準備：需自備SOD標準品，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標準品稀釋至如下系列濃度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升，參考樣品進行檢測。說明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降， SOD標準品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用；本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標準品，但可以使用SOD標準品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。

125mL PIPES Lysis Buffer with Triton，2X  PIPES Lysis Buffer with Triton，2X  常溫保存

1mL 溶液,50mg/mL Carbenicillin Disodium Salt -20℃避光保存

腸道菌富集肉湯培養(yǎng)基（USP） Enterobacteria Enrichment Broth-Mossel 250g

50mL ABTS 溶液，7mM  ABTS Solution -20℃避光保存

2 ug pZL507 pZL507 低溫運輸，-20℃保存

5次 一步法97孔板單菌落質(zhì)粒DNAout（離心法） One-Step 96 Microwell Plate Colony Plasmid DNAOUT 常溫

2 ug pET-48b(+) pET-48b(+) 低溫運輸，-20℃保存

金氏B培養(yǎng)基管  5ml*20支

1瓶 A9細胞株 A9 低溫運輸和保存

GN增菌液顆粒 Gram Negative Enrichment Broth 250g

100µg 人基因組DNA，男性 Human Genomic DNA 4℃保存

ATP檸檬酸裂解酶（ACL）測試盒微量法TCF12/HEB  轉(zhuǎn)錄因子12抗體 規(guī)格: 0.2ml

Goat Anti-human IgM/PE-Cy3  PE-Cy3標記的羊抗人IgM 規(guī)格: 0.1ml

BCL7C  B細胞白/蛋白7抗體 規(guī)格: 0.2ml

phospho-c-Raf(Ser43)  磷酸化原基因c-Raf抗體 規(guī)格: 0.1ml

ARH/LDL receptor adaptor protein  脂蛋白受體銜接蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

FGF13  纖維母細胞生因子13抗體 規(guī)格: 0.2ml

CD7  CD7抗體 規(guī)格: 0.1ml

phospho-PAK1(Ser144)  磷酸化p21激活激1抗體 規(guī)格: 0.1ml

Gelsolin  凝溶膠蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

SDF-1/CXCL12  基質(zhì)細胞衍生因子1抗體 規(guī)格: 0.1ml

Wnt8A  信號通路WNT8A抗體 規(guī)格: 0.2ml

E. coli LPS  大腸桿菌脂多糖抗體 規(guī)格: 0.2ml