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淀粉磷酸化酶(SP)測試盒微量法

簡要描述:淀粉磷酸化酶(SP)測試盒微量法公司正在出售的產品:包姜氏瓊脂培養基 英文名稱:Bordet-Gengou Agar Medium 產品規格:250g 解磷細菌培養基(有機磷細菌培養基) 英文名稱:Phosphate-solubilizing bacteria medium 產品規格:250g 固氮根瘤菌培養基 英文名稱:Nitrogen-fixing Rhizobium medium 產品規格:

  • 產品型號:
  • 廠商性質:經銷商
  • 更新時間:2023-12-26
  • 訪  問  量:980

詳細介紹

商品介紹:

測定意義:

淀粉磷酸化酶(Starch PhosphorylaseSP)是淀粉代謝過程的可逆反應酶,既可催化淀粉的合成,也可催化淀粉的分解。

在高等植物中,淀粉磷酸化酶(合成方向)主要存在于質體中,負責延長淀粉的 α-1,4-葡萄糖鏈的非還原末端;淀粉磷酸化酶(分解方向)主要存在于細胞質基質中,催化淀粉中的α-1,4-糖苷鍵磷酸解產生葡萄糖-1-磷酸,負責葡萄糖鏈的磷酸解,是淀粉代謝過程中的關鍵酶。

在植物體中,淀粉磷酸化酶分解方向的底物無機磷濃度比合成方向的底物葡萄糖-1-磷酸濃度幾乎高了兩個數量級,一般認為淀粉磷酸化酶只催化淀粉的分解,因此,分解方向的淀粉磷酸化酶具有重要測定意義。

測定原理:

淀粉磷酸化酶催化淀粉中的α-1,4-糖苷鍵與無機磷反應產生葡萄糖-1-磷酸,葡萄糖-1-磷酸在磷酸葡萄糖變位酶的作用下產生葡萄糖-6-磷酸,并在6-磷酸葡萄糖脫氫酶催化下還原NADP+產生NADPH,使340nm下吸光值增加。

需自備的儀器和用品:

紫外分光光度計、臺式離心機、可調式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

提取液:液體 100 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑一:液體 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。

試劑二:液體 15 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑三:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑四:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。

本試劑盒僅供研究使用公司實驗室提供免費代測,7個工作日出結果,提供原始數據!

產品名稱

規格

檢測方法

貨號

淀粉磷酸化酶(SP)測試盒微量法

100管/96樣

微量法

BK-01S6693

11.png 

實驗結果判斷我有妙招:

1、定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。

2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。

3、以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性,P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑,P/N小于1.5為陰性。

4、ELISA試劑盒目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照,與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。

與您分享常用不穩定試劑的分類及要求:

① 易揮發、低燃點的試劑要密封,放于陰涼、通風、遠離火源處保存。

② 與水蒸氣,水發生反應的物質要密封,并遠離水源保存。

③ 易與氧氣作用的試劑,應將其固體或晶體密封保存,不宜長期存放其水溶液,亞硫酸,氫硫酸溶液要密封存放,鉀,鈉,白磷更要采用液封形式。

④ 與二氧化碳反應的物質要密封保存,其相應的溶液較固體更易反應,所以更要注意密封保存。

⑤ 易揮發或自身分解的試劑要密封,放于陰涼通風處保存。

操作步驟:

1. 樣品的準備:

a. 細胞樣品的準備:收集細胞,用4 ℃或冰浴預冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預冷組織細胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心,取上清作為待測樣品。

b. 組織樣品的準備:動物用生理鹽水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心,取上清作為待測樣品。

d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒(P1511)測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細胞和組織的差異會比較大,該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準備20-100 ug蛋白量通常已經足夠用于后續檢測。

e. 根據蛋白濃度和預計的蛋白使用量,用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當稀釋樣品。例如,小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準備好的樣品如果當天測定,可以冰浴保存;如果當天不能完成測定,可以-70 ℃凍存,但建議盡量當天完成測定。

2. 試劑盒的準備工作:

a. WST-8酶工作液的配制: 參照下表,根據待檢測樣品(包括標準品) 數量,配制適量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可當天使用,但建議盡量現配現用。

注意:由于酶溶液的用量較少且易沉降,必須注意在使用前先輕輕離心一下,然后適當混勻后再使用。

b. 反應啟動工作液配制:將試劑盒提供的反應啟動液 (40X) 溶解后混勻,按1μl 反應啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋,即為反應啟動工作液。4℃或冰浴保存,可當天使用,但建議盡量現配現用。

c. (可選做) SOD 標準品準備:需自備SOD標準品,用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標準品稀釋至如下系列濃度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升,參考樣品進行檢測。說明:為避免稀釋后SOD酶活性的下降, SOD標準品宜現稀釋現使用;本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標準品,但可以使用SOD標準品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。

1g 苯 Phenylmethyl Sulfonyl Fluoride(PMSF) 室溫保存

改良Camp-BAP氏瓊脂添加劑B Modified Camp-BAP Agar additive B 1ml*5

100uL 萬VanA抗性基因PCR引物 Common PCR Primer -20℃保存

2 ug pMET C pMET C 低溫運輸,-20℃保存

原材料系列  

1瓶 SH-SY5Y細胞株 SH-SY5Y 低溫運輸和保存

改良Giolitti-Cantobi肉湯 Modified Giolitti-Cantoni Broth 250g

10mg 5- 氟 -5’- 脫氧尿苷 5’dFUrd (5-Fluoro-5’Deoxyuridine)        室溫保存

50T 大豆內源基因PCR檢測試劑盒  低溫運輸,-20℃保存

10次 一步式PAGE染液 One-Step PAGESTAIN 4℃保存

50T 呼吸道合胞病毒A組PCR檢測試劑盒  低溫運輸,-20℃保存

淀粉磷酸化酶(SP)測試盒微量法Gax  生終止特異性同源盒基因抗體 規格: 0.2mlC17orf82  17號染色體開放閱讀框82抗體 規格: 0.2ml

HSPA6  熱休克蛋白70家族蛋白6抗體 規格: 0.2mlDonkey Anti-Guinea pig IgG/Cy5  Cy5標記的驢抗豚鼠IgG 規格: 0.1ml

Rabbit Anti-Mink IgG/PE-Cy3  PE-Cy3標記的兔抗水貂IgG 規格: 0.1mlTransketolase(CT)  轉酮醇(轉羥乙醛)抗體(C端) 規格: 1ml

Ube2L3  泛素蛋白連接L3抗體 規格: 0.2mlCLLD7  核苷酸交換因子CLLD7抗體 規格: 0.2ml

MAGP2  纖微絲相關糖蛋白2抗體 規格: 0.1mlFrizzled 2  Wnt信號受體FZD2蛋白抗體 規格: 0.1ml

PNPT1  多核苷酸磷酸化蛋白抗體 規格: 0.2ml

IL12RB2  白細胞介素-12受體β2抗體 規格: 0.1ml

E2 tag  E2 tag標簽抗體 規格: 0.1ml

CDC4/FBW7/SEL10  瘤抑制因子FBW7抗體 規格: 0.2ml

CEBP-alpha  轉錄調節因子C/EBP α 抗體 規格: 0.1ml

Mouse Anti-Guinea pig IgG/Cy3  Cy3標記的小鼠抗豚鼠IgG 規格: 0.1ml

BEX4  腦表達X連鎖蛋白4抗體 規格: 0.2ml

 


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