總蛋白定量測試盒帶標準；考馬斯亮藍法

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儀器：
1、分光光度計/酶標儀/半自動生化分析儀（比色測定波長為550nm）
2、恒溫水浴箱或氣浴箱 （孵育溫度為37℃）
3、臺式離心機
4、漩渦混勻器
5、微量移液器
樣本收集與前處理：
血清（漿）可直接測定。
紅細胞：需按照試劑盒中說明書上紅細胞的測定方法進行提取后測定。
動物組織樣本：可用生理鹽水按重量體積比制備成組織勻漿液，離心取上清測定。
培養細胞、細菌、植物組織：常用PBS作為勻漿介質破碎后離心取上清測定。
具體的樣本前處理：參考我們隨貨發送的《實驗方法學》以及試劑盒中詳細說明書。

測定步驟：
1.加樣
1. 除包被外都需45度加樣
2.加樣體積要準確
3.管底加樣，不能加在管壁上
4.加樣時不能產生氣泡
2.加溫
1.加標本后和加結合物后，應立即放入按規定的反應溫 度的水浴箱。
2.各ELISA板不應疊在一起。
3.為避免蒸發，板上應加蓋，或將板平放在底部墊有濕 紗布的金屬濕盒中。
4.加入底物后，反應的時間和溫度通常不做嚴格要求。 如室溫高于20℃，ELISA板可避光放在實驗臺上，以便 不時觀察，待對照管顯色適當時，即可終止酶反應。
3.洗滌
1.洗滌在ELISA過程中不是反應步驟，但卻 是決定實驗成敗的關鍵。
2.目的是洗去反應液中沒有與固相抗原或 抗體結合的物質以及在反應過程中非特 異性吸附于固相載體的干擾物質。
4.讀板
1.陰性對照顏色極淺，在定性測定中一般 可采用目視比色。
2.如用酶標儀測定結果，準確性決定于 ELISA板底的平整與透明度、酶標儀的質 量和軟件的算法。
優點如下：
1、快速簡便：全程約50分鐘，可測100例左右樣本。
2、取樣量微：本法取手指或耳垂等末梢血20ul～50ul即可測紅細胞中的SOD，只需2ml靜脈血可測白細胞中的SOD及血小板中SOD，只需50mg左右組織就可測組織勻漿、胞漿中的SOD，0.2g組織可測線粒體及微粒體中的SOD。
3、靈敏度高：IC50=0.05g/ml，是鄰苯三酚法的18倍。
4、穩定性好：試劑盒2～8℃存放6個月有效。
5、再現性好：變異系數CV=1.7%。
6、回收試驗： X =103.3%。
7、受外界影響因素?。焊蓴_因素少，重復性強。
8、測試面廣：可測動物血液、組織、各種體液、灌流液等、各種培養細胞、細菌、植物組織、各種水產以及化妝品、保健品等，效果均佳。
Caco-2，人結直腸腺癌細胞枸櫞酸氯米芬（標準品）質量規格：含量測定Clomiphene

EB病毒轉化的人B細胞;KMY0922 人表皮角質形成細胞*培養基 100mL甲磺酸雙氫毒堿（標準品）質量規格：含量測定Dihydroergotoxine mesylate

小鼠腎集合管細胞(SV40轉化);M-16-醛基異麥冬黃烷酮A(標準品)質量規格：HPLC≥98%,標準品6-Aldehydoisoophiopogonanone A

C10ORF54 Others Human 人 B7-H5 / Gi24 / VISTA 人細胞裂解液 (陽性對照) 氯普噻噸（標準品）質量規格：檢查Chlorprothixene

U-87 MG人腦星形膠質母細胞瘤 U-87 MG of brain asocytic blastoma DMEM+10% FBS甲羥孕酮-d3質量規格：美國進口Medroxyprogesterone-d3
RKO-E6人結腸癌轉基因細胞 Human colon cancer RKO-E6 ansgenic cells MEM培養基(GIBCO)+10%FBS甲磺酸培氟沙星（標準品）質量規格：HPLC>98%,標準品Pefloxacin mesylate dihydrate

TNFSF13B Protein Human 重組人 BLyS / TNFSF13B / BAFF 蛋白培美曲塞二鈉質量規格：>99%,BR,水合物Pemetrexed Di

人臍帶間葉干細胞(臍帶)(HUMSC) (5×105) AGS人胃腺癌細胞 Human利奧西呱，BAY 63-2521質量規格：>98%,可溶性鳥苷酸環化酶激 (sGC)活劑Riociguat

EB病毒轉化的人B細胞(彝族);HYL馬來酸非尼拉敏質量規格：>98%,BRPheniramine Maleate

MYOC Others Human 人 MYOC / Myocilin 人細胞裂解液 (陽性對照) DANSYL-GCVLS質量規格：>98%,進分FTase Substrate, Fluorogenic
人肺動脈內皮細胞裂解物HPAECLBASICFUCHSIN,CERTIFIED堿性品紅生物染料級5G632-99-5RT

CD53 Others Cynomolgus 食蟹猴 CD53 (aa 107-181) 人細胞裂解液 (陽性對照) 雙-基氧本酚氧本基三嗪 BqMotrizinol 187393-00-6

小鼠骨髓細胞;FDC-P1CPA-mA偶氮錄膦mA100克色固

LM-6細胞，人肝癌細胞系 小鼠白血病細胞,L1210細胞 兔主動脈平滑肌細胞;SMCL-THREONINEL-蘇酸美國藥典級500G72-19-5RT

MA-782(小鼠癌細胞) 5×106cells/瓶×2(N-乙酰-D-半乳糖胺)
總蛋白定量測試盒帶標準；考馬斯亮藍法人APP基因轉染CHO細胞株;7WD10 食管癌細胞，Eca-109細胞 IBRS-2細胞，豬腎細胞系二氫酮酸甲酯(植物激素級)Methyl dihydrojasmonate質量規格：>90%,植物激素級

人胚肺成纖維細胞;MRC-5吲哚-4-羧酸甲酯(>98%，BR)Methyl indole-4-carboxylate質量規格：>98%，BR

HA Others H15N8 甲型流感 H15N8 (A/duck/AUS/341/1983) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細胞裂解液 (陽性對照) 綠(~65%,BS)Methylene green zinc chloride double salt質量規格：~65%,BS

人腦血管平滑肌細胞RNAHBCSMC miRNA5 μg亞甲紫3RAX(>90%，BS)Methylene violet 3RAX質量規格：>90%，BS

小鼠條紋神經細胞(MN-s)(1×106)2-琥珀酸(>98%,BR)Methylsuccinic acid質量規格：>98%,BR
實驗通用規則：
1、洗液不夠時，可用蒸餾水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸緩沖液，加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長期保存。
2、液體全部加完后，可將酶標板在桌子上平行輕輕晃動30秒，混勻液體。也可以用酶標儀的晃動功能。
3、底物有一定的毒性，終止液對皮膚有腐蝕性，應盡量避免接觸。
4、檢測前，要打開酶標儀，使之穩定10分鐘以上。
5、吸取液體時，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。
6、將液體加到酶標孔中時，避免槍頭和孔內液體接觸，可使槍頭上的液滴和孔壁接觸，液滴會自然流下去。
7、溫浴時，要用不干膠或膠帶紙封好酶標板，防止水分的蒸發。
8、洗板時，每次洗液加入后，應靜置1分鐘，使清洗更加*。沒有洗板機時，倒去液體后，要將酶標板在報紙或毛紙上用力拍干。
9、用槍吸取液體時速度不能太快，以免產生氣泡而使吸取量不準確。
10、底物是光敏感的，要在臨用前現配。