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肉桂醇脫氫酶(CAD)測試盒紫外分光光度法

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  • 產品型號:
  • 廠商性質:經銷商
  • 更新時間:2023-12-24
  • 訪  問  量:677

詳細介紹

特別提醒:本產品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。

產品名稱:肉桂醇脫氫酶(CAD)測試盒紫外分光光度法

產品規格:50管/48樣

檢測方法:紫外分光光度法

產品貨號:BK-01S6926

產品分類:其它系列
商品介紹:

測定意義:

CAD是木質素生物合成途徑中的關鍵酶之一,是木質素單體合成反應中的最后一步,催化多種不同的肉桂醛(香豆醛、芥子醛以及松柏醛等)生成與之相應的肉桂醇。該酶多存在于高等植物、酵母、菌類中,研究該酶可以探討多種生物細胞發育過程中木質素沉積的代謝機理,為減少水果石細胞含量提高其品質提供依據。

測定原理:

CAD催化肉桂醇和NADP生成肉桂醛和NADPH,在340nm下測定NADPH生成速率,即可反映CAD活性。

需自備的儀器和用品:

紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

所需的儀器和用品:

可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機、移液器、研缽、冰和蒸餾水

四、超氧化物歧化酶(SOD)的測定:

建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定,了解本批樣品情況,熟悉實驗流程,避免實驗

樣本和試劑浪費!

1、樣本制備

組織樣本:

取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進行

勻漿(或使用各類常見勻漿器)4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測液。

【注】:若增加樣本量,可按照組織質量(g):提取液體積(mL)15~10 的比例進行提取

細菌/細胞樣本:

先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;取約 500 萬細菌或細胞加入 1mL

提取液,超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次);

12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

【注】:若增加樣本量,可按照細菌/細胞數量(10

4):提取液(mL)為 500~10001 的比例進行提取。 液體樣本:直接檢測;若渾濁,離心后取上清檢測。

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實驗方法學:

一、肝素的配制:

市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。

肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉動,每隔5~10分鐘轉動一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。

二、血液樣本的收集:

全血根據收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。

1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時,直接低速離心分離出血清待用或保存。

2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。

選擇抗凝的注意點:

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后

用于測定。

100mL Tris飽和 Tris-Saturated Phenol 常溫避光保存

2 ug pCMV-Tet 3G pCMV-Tet 3G 低溫運輸,-20℃保存

葡萄糖酪胨瓊脂 Dextrose Casein-peptone Agar 250g

25g L-  L-Proline 室溫避光保存

明膠生化管  20支/盒

2 g NAC(抗氧化劑) Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存

10mL Ethidium Bromide Solution,10mg/mL  Ethidium Bromide Solution,10mg/mL  常溫保存

50g 脫脂奶粉(雜交專用) Nonfat Milk Powder 室溫

2 ug pIRES-neo pIRES-neo 低溫運輸,-20℃保存

STAA添加劑  1ml*5支

1瓶 LLC細胞株 LLC 低溫運輸和保存

肉桂醇脫氫酶(CAD)測試盒紫外分光光度法UBE2J2  泛素蛋白連接J2抗體 規格: 0.2ml

c-fos  c-fos抗體 規格: 0.1ml

Donkey Anti-human IgG/Cy3  Cy3標記的驢抗人IgG 規格: 0.1ml

Mouse anti-Bovine IgG ascites  小鼠抗牛IgG腹水 規格: 1ml

MDMX  MDM2樣P53蛋白結合抗體 規格: 0.2ml

CPEB1  細胞質多聚苷酸結合蛋白1抗體 規格: 0.1ml

CGB  嗜鉻粒素B抗體 規格: 0.1ml

NF-H/Neurofilament H/Neurofilament 200  高分子量神經絲蛋白抗體 規格: 0.1ml

COMMD8  銅代謝結構域蛋白8抗體 規格: 0.2ml

MAGEB4  黑色素瘤相關抗原B4抗體 規格: 0.2ml

C18orf1  18號染色體開放閱讀框1抗體 規格: 0.2ml

TERT  端粒逆轉錄抗體 規格: 0.1ml

注意事項:

1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時在冰上放置。

2、對照管只需要做一管。

3、若對照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。

4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管,對照管數值在什么范圍?

對照管的范圍是0.8-2。對照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現配現用;(2)沒有按順序加試劑;(3)反應時間不夠,可以延長反應時間(反應時間30min可以延長到40min)。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應倍數。

若出現測定管大于對照管,可能是樣本中雜質的影響太大,為了降低雜質的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測,通常可以使測定正常。計算公式中乘以相應稀釋倍數。



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