4T1（小鼠乳腺癌細胞）

產品特點:
1、 使用方便:不需昂貴設備。
2、 可以處理各種細菌菌體，包括新鮮菌液和冰凍菌體。
3、 將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。
4、 采用溫和的中性裂解組分，保持蛋白活性。
5、 含蛋白穩定劑，提取的蛋白穩定。
6、 紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。
7、 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。
8、 本試劑盒中不有EDTA，與金屬螯和層析等兼容。

在實驗過程中，根據要求可始終保持細胞活力，并可長時間監控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態、結構、生命活動等。

培養：
1.取出小鼠后瀝干酒精，放入超凈臺內，固定在泡沫板上。
2.用鑷子提起皮膚，用解剖剪剪開皮膚一個橫切口，將皮膚向上撕開，然后剪開肌肉等，暴露出腹腔，在左側找到脾臟，用彎頭眼科鑷取出脾臟，置于無菌培養皿中。
3.用生理鹽水將取出的脾臟清洗多次，并剔除多余無用的組織。
4.將篩網置于平皿中，脾臟置于篩網上，用彎頭鑷鑷住，輕輕在篩網上進行碾磨，同時不停滴加不含血清的培養液沖洗。
5.將碾磨好的細胞懸液吸入至離心管中，離心(1000rpm,5min)，吸去上清（去除血液等）。
6.加入10ml培養液，吹打混勻，取樣計數。
7.將稀釋好的細胞懸液分裝于培養瓶中，輕輕搖晃混勻，在培養瓶上。
實驗事項：
1. 試劑準備：所有試劑都必須在使用前達到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。  實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2.   加樣：加樣或加試劑時，請注意在吸取標本 / 標準品，酶結合物或底物時，前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導致不同的“預孵育"時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)好控制在10分鐘內，如標本數量多，推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育：為防止樣品蒸發，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內，酶標板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發；洗板后應盡快進行下步操作，任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態;同時應嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。
4.   洗滌：洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標儀讀數。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據所需的量配置使用，并使用相應的稀釋液配制，不能混淆。請確配置標準品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時，一次不要小于10μl)，以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差；請勿重復使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6.  反應時間的控制：加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請提前加入終止液終止反應，避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數。
7.  底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。
    建議檢測樣品時均設雙孔測定，以保證檢測結果的準確性。
    如標本中待測物質含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請后乘以稀釋倍數。

牛津瓊脂（OXA）平板（9cm） Oxford Agar Base 10個/包

PALCAM瓊脂平板（9cm） PALCAM Agar 10個/包

MRS瓊脂平板（9cm） MRS Agar 10個/包

TCBS瓊脂平板（9cm） Thiosulfate Citrate Bile Salts Sucrose Agar 10個/包

慶大霉素瓊脂平板（9cm） Gentamycin Agar 10個/包

BCYE瓊脂平板（9cm） BCYE Agar Base 10個/包

GVPC瓊脂平板（9cm） GVPC Agar Base 10個/包

我妻氏血瓊脂平板（9cm） Wagstsuma Blood Agar Base 10個/包

NA平板（加青霉素酶）（9cm） Nutrient Agar 10個/包

CIN-1瓊脂平板（9cm） CIN-1 Agar 10個/包

含青霉素酶TSA培養基平板（7cm） Tryptose Soya Agar 10個/包

含青霉素酶接觸皿培養基平板（5.5cm） Contact Plate Medium 10個/包

TSA培養基平板（9cm） TSA 10個/包

RODAC培養皿（TSA）（55mm） RODAC 10個/包

4T1(小鼠乳腺癌細胞)腫瘤壞死因子配體超家族成員9(TNFSF9)elisa檢測試劑盒 英文名稱 ：TNFSF9 ELISA Kit，英文縮寫：TNFSF9，

脂肪酶J(LIPJ)elisa檢測試劑盒 英文名稱 ：LIPJ ELISA Kit，英文縮寫：LIPJ，

粘蛋白7(MUC7)elisa檢測試劑盒 英文名稱 ：MUC7 ELISA Kit，英文縮寫：MUC7，

運動因子相關蛋白1(MRP1)elisa檢測試劑盒 英文名稱 ：MRP1 ELISA Kit，英文縮寫：MRP1，

原鈣黏素12(PCDH12)elisa檢測試劑盒 英文名稱 ：PCDH12 ELISA Kit，英文縮寫：PCDH12，

乙醇脫氫酶4(ADH4)elisa檢測試劑盒 英文名稱 ：ADH4 ELISA Kit，英文縮寫：ADH4，

巖藻糖基轉移酶7(FUT7)elisa檢測試劑盒 英文名稱 ：FUT7 ELISA Kit，英文縮寫：FUT7，

血小板親和蛋白4(PKP4)elisa檢測試劑盒 英文名稱 ：PKP4 ELISA Kit，英文縮寫：PKP4，

血管內皮生長因子受體2(VEGFR2)elisa檢測試劑盒 英文名稱 ：VEGFR2 ELISA Kit，英文縮寫：VEGFR2，

形成素2(FMN2)elisa檢測試劑盒 英文名稱 ：FMN2 ELISA Kit，英文縮寫：FMN2，

小腦肽2(CBLN2)elisa檢測試劑盒 英文名稱 ：CBLN2 ELISA Kit，英文縮寫：CBLN2，

酰基甘油激酶(AGK)elisa檢測試劑盒 英文名稱 ：AGK ELISA Kit，英文縮寫：AGK，

細胞因子受體樣因子1(CRLF1)elisa檢測試劑盒 英文名稱 ：CRLF1 ELISA Kit，英文縮寫：CRLF1，

無脈絡膜蛋白(CHM)elisa檢測試劑盒 英文名稱 ：CHM ELISA Kit，英文縮寫：CHM，

操作流程：
1.1主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養傳代及凍存：
1.2.1 細胞的復蘇培養 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養液（37℃預熱，8～10倍體積）離心管內,稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養瓶內，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養。
1.2.2 細胞傳代 原代培養的hek－293細胞48h換液1次，細胞長至60%～70%融合時，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散，為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細胞懸液，然后加入倍量的培養基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態特征。
1.4 細胞的計數 常規消化細胞，待細胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養基離心，再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數板蓋玻片的一側加微量細胞懸液，用10×物鏡觀察計數板四角大方格細胞數，按公式計算出細胞數。細胞數/ml原液＝(四方格細胞數之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數生長期的細胞，以0.25％胰酶消化成單細胞懸液，計數后分別接種于12個25cm2培養瓶中，每兩小時隨機取出3瓶細胞，吸除培養基及未貼壁細胞，加入胰消化酶消化、計數已貼壁細胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細胞數/接種細胞數) ，計算貼壁率。 
1.6 生長曲線 取指數生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養基。每天隨機取3孔，計數每孔細胞的數目并計算平均值。連續計數10d，繪制細胞生長曲線。