犬小孢子菌PCR檢測試劑盒說明書

注意事項：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

原理是由一對引物介導(dǎo)，能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增，經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增，擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1,擴增效率＝倍，使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
 特異性強
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性；
?
實驗過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

人脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2（Lp-PL-A2）ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒

人脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PL-A2)ELISA  試劑盒 96T/48T 試劑盒

人脂蛋白α(Lp-α)ELISA  試劑盒 96T/48T 試劑盒

人脂蛋白a（Lp-a）ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒

人脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)ELISA  試劑盒 96T/48T 試劑盒

人正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌因子(RANTES/CCL5)ELISA  試劑盒 96T/48T 試劑盒

人整合素連接激酶1(ILK-1)ELISA  試劑盒 96T/48T 試劑盒

人整合素αⅤβ3(Integrin αⅤβ3)ELISA  試劑盒 96T/48T 試劑盒

人真胰島素(TI)ELISA  試劑盒 96T/48T 試劑盒

人粘膜相關(guān)上皮趨化因子(MEC/CCL28)ELISA  試劑盒 96T/48T 試劑盒

人粘蛋白3(MUC3)ELISA  試劑盒 96T/48T 試劑盒

人粘蛋白1(MUC1)ELISA  試劑盒 96T/48TELISA

人粘蛋白/粘液素5B(MUC5B)ELISA  試劑盒 96T/48T 試劑盒

人粘蛋白/粘液素5AC(MUC5AC)ELISA  試劑盒 96T/48T 試劑盒

犬小孢子菌PCR檢測試劑盒說明書磷酸化蛋白酪氨酸激酶JAK-2抗原 0.5mgphospho JAK2(phospho-Tyr1007+Tyr1008)

MYOZ抗原 0.5mgMYOZ/MYOZ1(Myozenin)human、ret、mouse

足細(xì)胞特異蛋白抗原 0.5mgPCX/PODXL(Podocalyxin)

運動神經(jīng)元生存蛋白1抗原 0.5mgSMN1(survival of motor neuron 1)

甲狀核轉(zhuǎn)錄因子-1抗原 0.5mgTTF-1 (Thyroid Transcription Factor-1)

細(xì)胞色素P450單氧化酶(多肽抗原) 0.5mgCYP450(Cytochrome P450 monooxygenase)

肺耐藥相關(guān)蛋白(抗原) 0.5mgLRP/MVP (Lung resistance related protein)

鋅指蛋白300(抗原) 0.5mlZNF300 (zinc finger protein ZNF300)- middle

腸道病毒71型/手足口病病毒抗原 0.5mgEV71(Human enterovirus 71)VP4

甲硝唑偶聯(lián)血藍(lán)蛋白 1mgMetronidazole/KLH

熒光素標(biāo)記豚鼠IgG 0.3mlGuinea IgG/FITC

熒光素PE標(biāo)記大鼠IgG(細(xì)胞流式同型對照) 0.1mlRat IgG/PE

熒光素Cy3標(biāo)記猴IgG 0.1mlMonkey IgG/Cy3

生物素化兔IgG 0.1mlRabbit IgG/Biotin

兔子腫瘤壞死因子α 96TTNF- Alpha (Rabbit Tumor necrosis factor Alpha) ELISA Kit

技術(shù)原理：
 DNA的半保留復(fù)制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動子的參與下，根據(jù)堿基互補配對原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。
       在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實驗中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈，當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性，并設(shè)計引物做啟動子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。（ DNA高溫變性低溫復(fù)性）
       發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個循環(huán)加酶，使PCR技術(shù)變得非常簡捷、同時也大大降低了成本，PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用，并逐步應(yīng)用于臨床。