乙型肝炎病毒通用型PCR檢測試劑盒說明書

注意事項：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

原理是由一對引物介導(dǎo)，能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴增，經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增，擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1,擴增效率＝倍，使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
 特異性強
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性；
?
實驗過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

葡萄汁酵母 Saccharomyces uvarum人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（hMSCs）

嗜熱鏈球菌 Streptococcus thermophilus香菇 Lentinula edodes

基質(zhì)金屬蛋白酶15(MMP15)重組蛋白英文名稱：Recombinant Matrix Metalloproteinase 15 (MMP15)

3% NaC1賴氨酸脫羧酶發(fā)酵管BR20支國產(chǎn)/進(jìn)口

PC-12(高分)，PC12，大鼠腎上腺髓質(zhì)嗜鉻瘤分細(xì)胞株(高分)gersion

CNE-2Z(人鼻咽細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

C6, 大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞SF17(人腦瘤細(xì)胞)

小鼠腎成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

小鼠肝動脈平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基293E(人胚腎細(xì)胞（EBNA1基因修飾）)

RIN-m5f(大鼠胰島β細(xì)胞瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

長尾綠猴胚胎細(xì)胞英文名稱：4179

乙型肝炎病毒通用型PCR檢測試劑盒說明書二水合皮苷  Two hydrated root bark  436.41分子量：C21H24O10*：60-81-1

2,6-二溴甲  249.93  2,6- dibromo toluene*：69321-60-4分子量： C7H6Br2

乙酸鉀  174.24  Potassium phenyl acetate*：13005-36-2分子量： C8H7KO2

1,1,1-三氟乙酰丙酮銅(II)  369.7  1,1,1 -三氟乙酰丙酮銅（II）*：14324-82-4分子量： C10H8CuF6O4

(2-羥乙)氯三  342.8  (2- hydroxyethyl) three benzyl chloride*：23250-03-5分子量： C20H20ClOP

4-羥-2-甲喹啉  159.18  4- hydroxy -2- methyl group*：607-67-0分子量： C10H9NO

六  534.7  Six phenyl benzene*：992-04-1分子量： C42H30

6-溴-2-氯喹啉  242.5  6- -2- chloride*：1810-71-5分子量： C9H5BrClN

無花果蛋白酶  Fig protease  分子量：*：819

1,3,5-三(炔丙氧代)  240.26  1,3,5- three (Que Bingji) benzene*：114233-80-6分子量： C15H12O3

TMS-PZ    TMS-PZ*：dfs分子量：

技術(shù)原理：
 DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動子的參與下，根據(jù)堿基互補配對原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。
       在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實驗中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈，當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性，并設(shè)計引物做啟動子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。（ DNA高溫變性低溫復(fù)性）
       發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個循環(huán)加酶，使PCR技術(shù)變得非常簡捷、同時也大大降低了成本，PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用，并逐步應(yīng)用于臨床。