漢坦病毒通用PCR檢測(cè)試劑盒說明書

注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

原理是由一對(duì)引物介導(dǎo)，能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增，經(jīng)過n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1,擴(kuò)增效率＝倍，使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
 特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對(duì)原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；
?
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

TE671 subline No.2(人橫紋肌肉瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

M17肉湯/M17 Broth牛奶和制品中酸菌檢測(cè)和分離培養(yǎng)250克國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口

屎腸球菌 Enterococcus faeciumHBE, 正常人支氣管上皮細(xì)胞系

多枝鐮孢束梗鏈格孢 Alternaria bokurai

血管活性腸肽(VIP)重組蛋白英文名稱：Recombinant Vasoactive Intestinal Peptide (VIP)

QSG-7701(人正常肝細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

真菌培養(yǎng)基/霉菌培養(yǎng)基/Mould Medium用于無菌試驗(yàn)及真菌培養(yǎng)250克國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口

費(fèi)氏中華瘤菌 Sinorhizobium fredii串珠鐮孢 Fusarium moniliforme

Hep B1.2(人肝細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

豇豆慢生瘤菌 Bradyrhizobium vigna腐皮鐮孢 Fusarium solani

角蛋白1(KRT1)重組蛋白英文名稱：Recombinant Keratin 1 (KRT1)

漢坦病毒通用PCR檢測(cè)試劑盒說明書紅細(xì)胞補(bǔ)體受體1(CR1)重組蛋白  Recombinant Complement Receptor 1, Erythrocyte (CR1)

去唾液酸糖蛋白受體1(ASGPR1)重組蛋白  Recombinant Asialoglycoprotein Receptor 1 (ASGR1)

煙堿型膽堿受體α1(CHRNα1)重組蛋白  Recombinant Cholinergic Receptor, Nicotinic, Alpha 1 (CHRNa1)

HBZY-1(大鼠腎小球系膜細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

ECV-304(人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

SK-MEL-1(人皮膚黑色素瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

人肺腺細(xì)胞  NCI-H1975

小鼠垂體瘤細(xì)胞  MMQ

糖膽鹽發(fā)酵管培養(yǎng)基/Lactose Bile Broth用于大腸菌群、糞大腸菌群、大腸桿菌的測(cè)定250克國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口

堿性蛋白胨水/3%鈉堿性蛋白胨水/Alkaline Peptone Water副溶血性弧菌的選擇性增菌培養(yǎng)250克國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口

Rambach瓊脂250克國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口

人肺大動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

大鼠腸動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

小鼠視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

甘露醇卵黃多粘菌素瓊脂平板（MYP） 規(guī)格： 90mmX20個(gè) 用途： 用于蠟樣芽孢桿菌的菌數(shù)測(cè)定及分離培養(yǎng)(GB/T4789.28-2003中4.64，GB/T4789.14-2003，SN0176-92和...

明膠培養(yǎng)基(營(yíng)養(yǎng)明膠) 規(guī)格： 100g 用途： 供測(cè)定細(xì)菌液化明膠使用

技術(shù)原理：
 DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動(dòng)子的參與下，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。
       在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈，當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性，并設(shè)計(jì)引物做啟動(dòng)子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。（ DNA高溫變性低溫復(fù)性）
       發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對(duì)于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個(gè)循環(huán)加酶，使PCR技術(shù)變得非常簡(jiǎn)捷、同時(shí)也大大降低了成本，PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用，并逐步應(yīng)用于臨床。