似血矛線蟲PCR檢測試劑盒說明書

注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產物；9．PCR反應體系與反應條件。

原理是由一對引物介導，能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增，經過n個熱循環擴增，擴增產物中所含特定基因數是原始模板數的(1+E)n(0＜E＜1,擴增效率＝倍，使得檢測擴增產物中的特定基因成為可能。
 特異性強
PCR反應的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性；
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實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

三葉草瘤菌 Rhizobium trifolii酒假絲酵母 Candida kefyr

SW579(人甲狀腺鱗細胞 )5×106cells/瓶×2

印度墨汁/印度墨水/Indian ink炭疽桿菌檢測用配套試劑100毫升國產/進口

木耳 Auricularia auricula人間充質干細胞-肝

Protein A Affinity MagBeads/Protein A 磁性親和純介質1ml國產gersion

整合素β3(ITGβ3)重組蛋白英文名稱：Recombinant Integrin Beta 3 (ITGb3)

釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae小多孢菌 Micropolyspora sp.

大鼠輸尿管上細胞*培養基100mL

小鼠結腸細胞英文名稱：CT-26 WT

人大細胞肺細胞英文名稱：NCI-H460

T24, 人膀胱細胞人前列腺成纖維細胞*培養基

似血矛線蟲PCR檢測試劑盒說明書SF126(人腦瘤細胞)苜蓿中華瘤菌

豬膽粉/豬膽汁粉/豬膽抽提/Bile powder of pigBR100克國產/進口

煌綠增菌/亮綠增菌/亮綠肉湯/Brilltant Green Enrichment Broth蛋與蛋制品中沙門氏菌檢驗250克國產/進口

宋氏志賀氏菌 Shigella sonnei

中國臺灣霉 Rhizopus formosensis清酒酵母 Saccharomyces sake

芽孢桿菌屬 Bacillus sp.苜蓿中華瘤菌 Sinorhizobium meliloti

連環蛋白β1(CTNNβ1)重組蛋白  Recombinant Catenin Beta 1 (CTNNb1)

α-清蛋白(αLA)重組蛋白  Recombinant Alpha-Lactalbumin (aLA)

酸性成纖維細胞生長因子(FGF1)重組蛋白  Recombinant Fibroblast Growth Factor 1, Acidic (FGF1)

橄欖色鏈霉菌 Streptomyces olivaceusA9(小鼠皮下結締組織細胞)

RKO-AS45-1(人結腸轉基因細胞)泡盛曲霉 Aspergillus awamori

技術原理：
 DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動子的參與下，根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
       在聚合酶鏈式反應實驗中發現，DNA在高溫時也可以發生變性解鏈，當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復性，并設計引物做啟動子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。（ DNA高溫變性低溫復性）
       發現耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個循環加酶，使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本，PCR技術得以大量應用，并逐步應用于臨床。