埃希氏菌通用PCR檢測試劑盒廠家

原理是由一對引物介導，能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增，經過n個熱循環(huán)擴增，擴增產物中所含特定基因數是原始模板數的(1+E)n(0＜E＜1,擴增效率＝倍，使得檢測擴增產物中的特定基因成為可能。
 特異性強
PCR反應的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性；

注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環(huán)次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產物；9．PCR反應體系與反應條件。

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實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

技術原理：
 DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動子的參與下，根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
       在聚合酶鏈式反應實驗中發(fā)現，DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈，當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復性，并設計引物做啟動子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。（ DNA高溫變性低溫復性）
       發(fā)現耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個循環(huán)加酶，使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本，PCR技術得以大量應用，并逐步應用于臨床。

人前列腺上皮細胞*培養(yǎng)基大腸桿菌 Escherichia coli

RWPE1(人前列腺上皮細胞)5×106cells/瓶×2

酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂/YPD瓊脂/YEPD瓊脂/Yeast Extract Peptone Dextrose Agar生物制品和蜜漿制劑酵母菌總數測定250克國產/進口

沼澤紅假單胞菌 Rhodosedoseudomouas padustris香菇 Lentinula edodes

無菌豚鼠血清/Sterile Defidrinated Guinea pig BloodBR200毫升國產/進口

波形蛋白(VIM)重組蛋白英文名稱：Recombinant Vimentin (VIM)

曲霉 Aspergillus niger動物雙歧桿菌 Bifidobacterium animalis

苜蓿中華瘤菌 Sinorhizobium meliloti鏈霉菌 Streptomyces sp.

小鼠腎小管平滑肌細胞*培養(yǎng)基100mL

人滑膜細胞*培養(yǎng)基100mL

人角膜成纖維細胞*培養(yǎng)基100mL

埃希氏菌通用PCR檢測試劑盒廠家4--3,5-二溴吡  251.91  4- amino -3,5- dibromopyridine*：84539-34-4分子量： C5H4Br2N2

2-巰-4-噻唑  193.29  2- mercapto -4- phenylthiazole*：2103-88-0分子量： C9H7NS2

2,4,5-三咪唑  445.77  2,4,5- three*：1746-25-4分子量： C3HI3N2

2,9-二溴-1,10-菲咯啉    2,9- dibromo -1,10- Phenanthroline*：39069-02-8分子量：

α,α'-二(4-羥)-1,4-二異丙  346.47  Alpha, alpha '- two (4- hydroxyphenyl) -1,4- two isopropyl benzene*：2167-51-3分子量： C24H26O2

環(huán)氧丙烷  Epoxy propane  58.08分子量： C3H6O*：75-56-9

二氯酞菁硅  Two chloride  611.52分子量： C32H16Cl2N8Si*：19333-10-9

5-羧酸-3-吡甲酸乙酯  195.17206  5- carboxylic acid -3-*：分子量： C9H9NO4

4-(2-羥乙氧)砜  338.37  4- (2- hydroxy group B) phenyl group*：27205-03-4分子量： C16H18O6S

二甲硝咪唑-D3    Two a -D3*：64678-69-9分子量： C5D3H4N3O2

碳酸甲丙酯  118.13  Methyl propyl carbonate*：1333-41-1分子量： C5H10O3