球孢白僵菌PCR檢測試劑盒說明書

注意事項：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

原理是由一對引物介導(dǎo)，能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增，經(jīng)過n個熱循環(huán)擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1,擴(kuò)增效率＝倍，使得檢測擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
 特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；
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實(shí)驗過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

β-桉葉醇;β-Eudesmol CAS 51317-08-9 *  規(guī)格： 20mg

敵草隆;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品 CAS 330-54-1 *  規(guī)格： 0.1g

莠去津;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 CAS 102029-43-6 *  規(guī)格： 0.1g

玉嘧磺隆;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 CAS 122931-48-0 *  規(guī)格： 0.1g

敵稗;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 CAS 709-98-8 *  規(guī)格： 0.1g

烯唑醇;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 CAS 76714-88-0 *  規(guī)格： 0.1g

呋胺;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 CAS 165252-70-0 *  規(guī)格： 0.1g

右旋苯;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 CAS 39515-40-7 *  規(guī)格： 0.1g

線威;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 CAS  *  規(guī)格： 0.1g

芐嘧磺隆;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 CAS 83055-99-6 *  規(guī)格： 0.1g

鳥嘌呤核苷(鳥苷) CAS 118-00-3 *  規(guī)格： 100mg

L-亮氨酸;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 CAS 61-90-5 *  規(guī)格： 0.5g

測定二氧化配套試劑（含甲醛儲備液、0. CAS  *  規(guī)格： 3支/套

二乙酰基大花旋覆花內(nèi) CAS 151513-70-1 *  規(guī)格： HPLC≥98%;10mg

7-O-杧果苷 CAS 31002-12-7 *  規(guī)格： HPLC≥98%;20mg

球孢白僵菌PCR檢測試劑盒說明書異戊烷  I-Pentane  72.15分子量： C5H12*：78-78-4

吉馬酮  Germacrone  218.33458分子量：C15H22O*：6902-91-6

苊  Acenaphthene  154.21分子量： C12H10*：83-32-9

3-三氟甲  161.12  3- three fluorine toluene*：98-16-8分子量： C7H6F3N

55'-二甲-2,2'-二吡  184.24  Two 5'- 5 -2,2'- two*：1762-34-1分子量： C12H12N2

6,8-二甲氧-4-甲喹啉水合物  203.24  6,8- two, a -4- methyl group, a group of oxygen based*：51049-14-0分子量： C12H13NO2·xH2O

氯五氨氯合鈷(III)  250.44  Five ammonia chloride (III)*：13859-51-3分子量： Cl3CoH15N5

堿性藍(lán)6B  Alkaline blue 6B  1231.42分子量： C74H59N6NaO7S2*：8004-90-8

3,4,5-三氟硝  177.08  3,4,5- three*：66684-58-0分子量： C6H2F3NO2

2,6-二氟甲  128.12  2,6- two f*：443-84-5分子量： C7H6F2

氯1-丙-3-甲咪唑  158.63  Chlorinated 1- -3- methyl group*：65039-10-3分子量： C7H11ClN2

技術(shù)原理：
 DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動子的參與下，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。
       在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實(shí)驗中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈，當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性，并設(shè)計引物做啟動子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。（ DNA高溫變性低溫復(fù)性）
       發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個循環(huán)加酶，使PCR技術(shù)變得非常簡捷、同時也大大降低了成本，PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用，并逐步應(yīng)用于臨床。