大巴貝蟲PCR檢測試劑盒說明書

注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

原理是由一對引物介導，能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增，經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增，擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1,擴增效率＝倍，使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
 特異性強
PCR反應的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性；
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實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

糖抗原125(CA125)重組蛋白英文名稱：Recombinant Carbohydrate Antigen 125 (CA125)

K-562(人慢性骨髓性白血病細胞)5×106cells/瓶×2

巴固氮螺菌 Azospirillum brasilenseGBC-SD(人膽囊細胞)

雙孢蘑菇 Agaricus bisporus苜蓿中華瘤菌 Sinorhizobium meliloti

胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基 規(guī)格： 250g 用途： 可廣泛應用于細菌的培養(yǎng)，特別用于消毒劑消毒效果的測試、金黃色葡萄球菌的非選擇性增菌培養(yǎng)及蠟...

酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(YPD) 規(guī)格： 250g 用途： 用于酵母菌的培養(yǎng)，及供藥品和生物制品中含王漿和蜂蜜的合劑酵母菌數(shù)測定用。

中分子量蛋白Marker50次國產(chǎn)

谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶α3(GSTα3)重組蛋白英文名稱：Recombinant Glutathione S Transferase Alpha 3 (GSTa3)

HL-7702(人肝正常細胞)5×106cells/瓶×2

RL1(大鼠肺成纖維樣細胞)小鼠胎兒成纖維細胞*培養(yǎng)基

人非小細胞肺腺細胞英文名稱：NCI-H157

大巴貝蟲PCR檢測試劑盒說明書人腦微血管內(nèi)皮細胞  HBMEC

液體沙氏培養(yǎng)基/沙氏液體培養(yǎng)基/Liquid Sabourand Medium真菌、酵母菌增菌培養(yǎng)250克國產(chǎn)/進口

牛膽鹽/Bile salt from oxBR，60%25克國產(chǎn)/進口

酚紅葡萄糖湯/Phenol Red Dextrose Broth蠟樣芽孢桿菌葡萄糖分解試驗250克國產(chǎn)/進口

LB湯/LB Broth用于細菌增菌培養(yǎng)250克國產(chǎn)/進口

人胎盤羊膜細胞*培養(yǎng)基100mL

大鼠胎兒表皮角質(zhì)形成層細胞*培養(yǎng)基100mL

麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基 規(guī)格： 250g 用途： 供酵母菌的培養(yǎng)、鑒定及保存菌種用。

胰化大豆瓊脂 規(guī)格： 250g 用途： 用于普通的或營養(yǎng)要求較高的細菌的培養(yǎng)，還用于醫(yī)藥工業(yè)潔凈室無菌程度的監(jiān)測。

Discs大同源物關聯(lián)蛋白5(DLGAP5)重組蛋白  Recombinant Discs, Large Homolog Associated Protein 5 (DLGAP5)

蛋白激酶Cβ1(PKCβ1)重組蛋白  Recombinant Protein Kinase C Beta 1 (PKCb1)

膠質(zhì)細胞系來源神經(jīng)營養(yǎng)因子受體α1(GFRα1)重組蛋白  Recombinant Glial Cell Line Derived Neurotrophic Factor Receptor Alpha 1 (GFRa1)

絲蛋白結(jié)合LIM蛋白1(FBLIM1)重組蛋白  Recombinant Filamin Binding LIM Protein 1 (FBLIM1)

腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體(TRAIL)重組蛋白  Recombinant Tumor Necrosis Factor Related Apoptosis Inducing Ligand (TRAIL)

MDCK(犬腎細胞)5×106cells/瓶×2

FO(小鼠骨髓瘤細胞)5×106cells/瓶×2

技術(shù)原理：
 DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動子的參與下，根據(jù)堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
       在聚合酶鏈式反應實驗中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈，當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復性，并設計引物做啟動子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。（ DNA高溫變性低溫復性）
       發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個循環(huán)加酶，使PCR技術(shù)變得非常簡捷、同時也大大降低了成本，PCR技術(shù)得以大量應用，并逐步應用于臨床。